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细胞的细胞毒性实验有哪些方法
 2021年01月22日 |阅读次数:840
CCK-8实验:
全称为Cell Counting Kit-8,在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被细胞内脱氢酶还原成水溶性的甲臜染料,生成的(橙黄色)甲臜量与活细胞数量成正比,即颜色的深浅与细胞的增值成正比。因此可以用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

MTT
MTT全称 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐, 活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。对于细胞样本加入MTT试剂反应,形成甲臜结晶。随后加入二甲基亚砜(DMSO)重新溶解细胞中的甲臜,得到紫色混合液。用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值。细胞存活率=(实验组吸光度值-空白组吸光度值)/(对照组吸光度值-空白组吸光度值)*100%。

两者区别:加入CCK-8后活细胞生成的具有高度水溶性的黄色甲瓒产物,由于其毒性较小,需要摸索检测时间,而加入MTT后活细胞生成的为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒
CCK-8对细胞毒性较小,这也是与MTT区别较大的地方。

对于悬浮细胞来说,建议使用cck8法,因为MTT检测的是细胞内的物质,加入MTT4h以后,需要先将MTT吸出,再加DMSO溶解,这一步骤容易造成很大误差,CCK8法可以规避这一风险。

细胞毒性实验


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